1、生长激素测定增高：白天血清生长激素浓度明显升高。正常生长激素放免测定的上限为5μg/L。近来尿生长激素测定是一种最近发展起来的无创性生长激素测定技术。一般本病患者的尿生长激素为正常人的50～100倍。
2、血中IGF-I测定明显增高：血清中IGF-I的水平能够反应生长激素的水平，而且IGF-I半衰期长，血清浓度比较稳定。IGF-I正常值为0.38～26.0μg/ml。
3、生长激素释放激素测定：用于鉴别垂体生长激素腺瘤和下丘脑或外周的内分泌过量的生长激素释放激素导致垂体生长激素细胞增生。这两类患者均有肢端肥大症的表现。
4、葡萄糖抑制试验：口服葡萄糖100g后1h测定血浆GH，测值10μg/L者可诊断。
5.、CT及MRI：可以有效地检出肢端肥大症患者的垂体异常。绝大多数患者有体积较大的垂体瘤，因此几乎所有的患者均可发现垂体肿瘤；并有1/3的患者出现蝶鞍外的扩张。
6、心电图：S-T段上升，可有T波异常。左室肥厚、劳损；室内传导阻滞（束支传导阻滞）等。
7、心脏超声图：室间隔呈不对称性肥厚，左右心室肥大或单纯性室间隔肥厚，左室射血时间（LVET）缩短，射血前（PEP）时间延长，PEP/LVET比值增大。