一、细胞培养
组织培养为最敏感和特异的诊断方法，亦可用于病毒的分型，在病毒高滴度的标本，24～48h内可获得阳性结果，接种后72h内在90％的培养基中可产生特征性的细胞病变效应；而在低滴度的标本，7天后方可看到特征性变化，然而，组织培养并不能始终确立病毒的存在，这是因为标本的收集和运送欠妥以及使用抗病毒药可能出现假阴性。
二、检测病毒
1、Papanicolaou(Pap)或Tzank试验：是快速，便宜的细胞诊断方法，先进行病变部位的刮片细胞染色，能在20min内显示细胞改变，即多核巨细胞形成，胞质空泡样变和包涵体，阳性涂片结果可靠，但不能区分水痘-带状疱疹病毒(varicella-zostervirus，VZV)和HSV-1或HSV-2，阴性涂片亦不能排除疱疹病毒感染，在理想情况下，Tzanck涂片约50％阳性，其敏感性和特异性均较低，且依靠检测者经验；由于许多技术和实际原因，应用受限。
2、单克隆抗体间接免疫荧光染色检查：用于病灶刮片检查，敏感度为78％～88％，假阳性少见，直接电子显微镜检查很诱人，因为可在2h内完成，但敏感性多变，特异性低，酶联免疫吸附试验用于单纯疱疹病毒的检查，敏感度可达95％，特异性高，但标本收集后如不立即检查其敏感度下降，亦有采用放射免疫分析法检查单纯疱疹病毒，荧光素标记抗体试验，间接免疫过氧化物酶试验或使用单克隆抗体的酶免疫分析法等，这些方法价格低廉，快速，不需要细胞培养技术，新近产生的用单克隆抗体进行直接荧光素标记抗体染色的离心技术快速敏感，但更常用于巨细胞病毒的诊断，使用免疫荧光直接检测HSV抗原，特异性高但敏感性差，且依靠标本质量。
酶免疫测定法(EIA)测HSV抗原，有培养放大技术和直接检测技术，研究结果显示：HSVEIA对各种来源的标本高度敏感(93.7％)，高度特异(96.6％)；方法简单，重复性好，快速(4h)，标本受细菌污染时影响结果，已治愈或正在进行抗病毒治疗的病人结果不可靠，气管支气管标本和下呼吸道分泌物的病毒培养，阳性结果通常需2～5天，但阴性结果需2周才能确定。