胰岛素冷冻后通常不能使用，因为冷冻会导致蛋白质变性而失效。未开封的胰岛素需冷藏保存，已开封的胰岛素在室温下可短期存放。
作为一种对温度敏感的蛋白质激素，胰岛素在冷冻条件下会破坏其结构，形成肉眼可见的颗粒或絮状物，从而失去降糖效果。即使解冻后外观无明显变化，其生物活性也可能大幅降低。未开封的胰岛素笔芯或瓶装胰岛素应存放在2-8℃的冰箱冷藏室内，避免紧贴冰箱后壁以防结冰。已开封使用的胰岛素可以在不超过25℃的室温环境下保存，但必须在4周内用完。反复从冰箱取出使用可能因温差导致药液收缩膨胀，加速失效。
虽然极少数新型胰岛素类似物可能对低温有稍强的耐受性，但一旦冷冻仍需丢弃。若胰岛素不慎冷冻，即便仅部分结冰也应整体废弃。使用冷冻过的胰岛素可能导致血糖控制失效，出现多饮多尿、视物模糊等高血糖症状，严重时甚至可引发酮症酸中毒。正确保存的胰岛素应为无色透明液体，混悬型胰岛素摇晃后呈均匀雾状；如果出现变色、浑浊、黏稠或沉淀，则提示已经变质。
每次使用前检查胰岛素性状非常重要，外出携带时应用专用保温盒以避免极端温度影响。注射前将冷藏胰岛素放置至室温可以减少注射时的不适感。糖尿病患者应该定期监测血糖水平，发现异常波动时应及时就医调整治疗方案。未使用的胰岛素需要在原包装盒内避光保存，并远离儿童可触及的位置。